CircRNA 工艺平台
Circular RNA · 基于自剪接技术的环状 RNA 生产平台
平台概述
云心质力已建成基于 Group I permuted intron-exon (PIE) 自剪接技术的 CircRNA 生产平台。该平台通过定制化质粒构建与先进的环化技术，实现从质粒生产到 LNP 包封的全流程服务，IVT 产量达 >6.0 g/L，下游回收率 >60%，可规模化生产 1mg 至 50g，满足不同项目需求。
T7 启动子
在体外转录 (IVT) 过程中驱动目标基因转录。
IRES 内部核糖体进入位点
支持真核细胞中非帽子依赖的翻译机制。
PIE 自剪接结构
3' 外显子-外显子2 与 5' 内含子-外显子1 驱动构象变化，碱基配对形成 P10 双链，实现高效环化。
报告基因检测
荧光素酶 (Luciferase) 基因作为报告基因，用于基因表达检测。
工艺全流程
从质粒生产到无菌灌装的 9 步全流程工艺，实现 CircRNA 的高效生产与质量控制。
1
质粒生产
高纯度超螺旋质粒制备
2
线性化质粒
限制性酶切线性化
3
mRNA 生产
IVT 体外转录
产量 >6.0 g/L
4
环化反应
PIE 自剪接环化
5
超滤/透析 + RNaseR 处理
去除线性 RNA 杂质
6
粗品纯化 + 精纯
色谱纯化
回收率 >60%
7
超滤/透析
缓冲液置换与浓缩
8
LNP 包封
脂质纳米颗粒封装
9
无菌过滤与灌装
最终制剂
IVT 产量达 >6.0 g/L，下游回收率 >60%，可规模化生产 1mg 至 50g，满足从研发到临床的多样化需求。
质量检测与放行
CircRNA 分析方法与规格标准，共 17 项检测项目，覆盖序列、纯度、环化效率、安全性等关键质量属性。
| 序号 | 检测项目 | 检测方法 | 规格标准 |
|---|---|---|---|
| 01 | 序列 | Sanger 测序 | 与理论序列一致 |
| 02 | RNA 长度 | 琼脂糖凝胶电泳 | 与理论长度一致 |
| 03 | RNA 含量 | 紫外分光光度法 | 目标浓度 ± 20% mg/ml |
| 04 | RNA 完整性 | 毛细管电泳 (CE) | >90% 或按需 |
| 05 | 纯度 | SEC-HPLC | ≥85% |
| 06 | 纯度 | UV 260/280 | 1.9-2.5 |
| 07 | 纯度 | RP-HPLC | ≥85% |
| 08 | 环化效率 | CE/HPLC | 根据工艺特性确定杂质 |
| 09 | 总蛋白残留 | Micro BCA | ≤ 1% (w/w CircRNA) |
| 10 | 质粒 DNA 残留 | q-PCR | ≤1ng DNA/mg CircRNA |
| 11 | dsRNA | ELISA | ≤ 0.1% |
| 12 | 游离核苷酸残留 | RP-HPLC-MS/MS | 报告值 |
| 13 | RNaseR 耐受性 | 琼脂糖凝胶电泳 | 报告值 |
| 14 | 无菌 | 培养法/薄膜过滤 | 无菌 |
| 15 | 内毒素 | USP | <10 EU/mg RNA |
| 16 | 外观 | 目视/光检查 | 无色澄清 |
| 17 | pH | USP<791> | 7.0~8.0 |
平台亮点
高产量 IVT
IVT 产量达 >6.0 g/L，满足规模化生产需求。
高纯度环化
下游回收率 >60%，IIT 项目环化纯度达 >92.6%。
灵活规模化
可规模化 1mg 至 50g，覆盖从研发到临床的多样化需求。
全流程覆盖
从质粒生产到 LNP 包封一站式服务，9 步工艺无缝衔接。
全面质控体系
17 项质量检测项目，覆盖序列、纯度、环化效率、安全性等关键属性。
稳定性优异
CircRNA 相比线性 mRNA 具有更优异的稳定性和更低的免疫原性，可持续表达蛋白。