ssDNA 工艺平台,赋能基因编辑与纳米技术

Single-stranded DNA · RCA 滚环扩增 & 噬菌体生产双技术路线

平台概述

ssDNA(单链 DNA)在基因编辑、测序检测、DNA 信息文库、材料科学等领域具有广泛应用。云心质力 ssDNA 工艺平台提供滚环扩增(RCA)噬菌体生产两大技术路线,配备自研 LEAP DNA 聚合酶(已获 FDA DMF 备案),可生产从短链到超长链(> 20,000 nt)的 ssDNA,满足从研究级到 GMP 级的全规模需求。

ssDNA 应用领域

基因编辑

CRISPR/Cas9 供体模板,提升编辑效率与特异性,减少脱靶

测序 / 检测

探针、引物、传感器,高特异性与灵敏度

DNA 信息文库

高密度数据存储介质,可达 2.15 亿千兆字节

材料科学

DNA 折纸术、纳米自组装结构

LEAP 酶 — DMF 备案产品

FDA DMF 备案

LEAP DNA 聚合酶(LinearDNA Enzymatically Amplifying Platform)

2023 年 11 月获美国 FDA DMF 备案,可在药物申报中直接引用,大幅缩短审查与评估周期。酶纯度 > 95%,工艺稳定性与可重复性强。适用于 RCA、MDA、WGA、SNP/STR 检测、游离 DNA 扩增、测序模板制备等多种场景。

工艺路线一:滚环扩增(RCA)

恒温核酸扩增方法,DNA 聚合酶与环状模板结合,催化 dNTPs 合成单链 DNA 分子

01

基因合成

根据客户需求合成目标片段

02

质粒构建与制备

构建至特定骨架,菌株生产并提取超螺旋质粒

03

模板制备

限制酶酶切、环化目标片段,内切酶切割形成缺口

04

RCA 反应

缺口化质粒模板进行恒温扩增反应

05

片段化酶切

脱氧核酶酶切将连续 ssDNA 片段化

06

ssDNA 分离纯化

层析技术获得高纯度 ssDNA

工艺路线二:噬菌体生产

基于 M13 丝状噬菌体系统,含环状单链 DNA 基因组,可容纳外源 DNA 制备 ssDNA

01

质粒构建

质粒骨架含噬菌体包装、宿主菌复制与筛选基因序列

02

噬菌体库

包装噬菌体并建立噬菌体毒种库

03

噬菌体生产与纯化

优化 MOI、收获时间;去除宿主蛋白、DNA 等杂质

04

噬菌体基因组提取

裂解噬菌体,提取纯化噬菌体基因组

05

片段化酶切

脱氧核酶酶切将连续 ssDNA 片段化

06

ssDNA 分离纯化

层析技术获得高纯度 ssDNA

平台亮点

双技术路线

RCA 滚环扩增 + 噬菌体生产,灵活匹配不同长度与应用需求

LEAP 酶 DMF 备案

自研 LEAP DNA 聚合酶已获 FDA DMF 备案,纯度 > 95%

全规模生产

从 400 mL 到 1000 L 灵活放大,GMP 设施符合 FDA 及 EMA 规范

数智化生产

7×24 小时全天候运转,全自动灌装与在线监控,降低人工成本

冻干灌装能力

研究级和 GMP 级冻干灌装线,冻干工艺开发与放大

全流程服务

从研究服务、工艺开发到 GMP 生产的端到端解决方案

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